一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肝星形细胞THSC

生长特性：冻存条件为无血清冻存液。

培养体系：DMEM

传代方法：第一次建议以1:2的比例进行传代。

传代情况：每2天更换培养基。

备注：请使用无菌离心管收集培养基，以便进行对比培养。如对比效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，将其培养至良好状态，完全填充培养液并封好瓶口，即可确保运输过程中的细胞安全。首先，使用75%酒精消毒整个细胞瓶，随后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。通过显微镜观察细胞生长情况，并拍照记录（建议拍摄40x、100x及200x倍各一张），前三天的照片对后续售后服务至关重要，如未提供照片则视为细胞状态良好。传代后，建议一瓶使用原瓶完全培养基，另一瓶使用自配培养基以便进行对比培养，请在换液后松开瓶盖。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

在细胞未超过80%汇合度时，收集培养液至离心管，保留5ml完全培养基，并置于37℃、5% CO2孵箱中培养。若细胞密度超80%，即可进行传代，步骤如下：

弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS洗涤细胞1-2次。
加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞是否消化至大部分变圆并脱落，然后轻敲培养瓶并添加5ml以上的完全培养基以终止消化。
轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬。
将细胞悬液以1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新培养基至每瓶5-8ml，最后置于37℃、5% CO2的培养箱中培养。

b. 细胞冻存

当细胞生长覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗一次。
加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞变圆后迅速终止消化，并轻轻吹打使细胞脱落，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
弃去上清液，沉淀细胞后加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管。
将冻存细胞直接放入-80℃冰箱保存，如需转入液氮罐，请在-80℃冰箱中存放超过24小时后再转入。

c. 细胞复苏

从液氮中取出冻存管并快速放置在37℃水浴中解冻，直至无结晶，然后用75%酒精擦拭外壁。
将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
弃上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，置于37℃、5% CO2培养箱中培养。
第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

有些细胞在运输过程中可能会轻微脱落，这是正常现象。如脱离细胞较多，可将培养瓶内所有培养液收集至离心管中，离心后收集上清进行过渡培养。针对沉淀部分，加入1-2ml胰酶，轻轻吹打，消化1-2分钟后，添加5ml完全培养基以终止反应。再离心、去上清和重悬，并按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2的培养箱中培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题，可以重发的情况包括：

在运输过程中出现的细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液，均可申请重发。
如细胞在收到后48小时内出现污染，请提供真实实验数据，我们会核实后安排重发。
常温及干冰运输的细胞，如在规定时间后未存活，请提供真实的细胞状态照片，我们可安排重发。
如在规定期间发生污染且未开封的细胞，将予以重发。
如细胞活性受到影响，请在7天内提供实验数据进行判断，我们会视情况安排重发。
细胞收到后的前三天请拍照记录，未提供照片的将视为产品合格。

2）不予重发的情况包括：

客户操作不当导致的细胞污染。
不当处理导致细胞状态恶化。
非推荐的培养体系引起的细胞问题。
未提供前3天的照片。
细胞在培养时处理不当。
收到后2天内未通知的。
具体情况另行商议。

以上为尊龙凯时品牌大鼠肝星形细胞THSC的培养说明，希望对您的研究和实验提供帮助。